细胞铁离子试剂盒操作过程中避免与铁器接触

本试剂盒采用亚铁嗪比色法可以定量细 胞铁离子，线性范围 5~300uM。产品包括标准品和空白对照，本试剂盒可进行 100 个样品 的检测。

 
原理：

铁与蛋白结合成复合物，在酸性介质中铁从复合物中解离出来，再被还原剂还原成二价铁， 并与亚铁嗪生成紫红色化合物，在 540-580nm 处可比色测定。

操作步骤：

1. 样品准备（以 24 孔板为例）：

将含铁元素 DMEM 培养过的细胞用冷的 PBS 2ml 洗两遍，将 PBS 吸弃（若不马上检测可将 其冻于-20℃）。200ul/孔裂解液裂解细胞，置于摇床裂解 2h。

2. 标准品的稀释：用试剂盒提供的稀释用液将 3mM 的标准品母液稀释为：300 uM、150uM、

75uM、37.5uM、18.75uM、9.38uM、4.69uM。注意倍比稀释并设置 0 浓度对照反应管。

3. 将缓冲液与 4.5%高锰酸钾溶液按 1:1 混匀，称为混液 A。

4. 参考下表使用 1.5ml 离心管，设置空白对照管、标准品管和样品管。如果样品中的铁元 素含量过高，用裂解液适当稀释后再进行测定。

5. 混匀，60℃ 孵育 1h。

6. 冷却至室温，将管盖与管壁上的液滴离心入管底。

7. 加入 30ul 铁离子检测剂，混匀，室温孵育，30min。

8. 取 200ul 于 96 孔板，在 550nm 测定吸光度。如果不能测定 550nm，也可以在 540nm~580nm 范围内检测。

9. 绘制标准曲线并计算铁离子浓度。

说明：

1. 本试剂盒不受锰离子、镁离子、镍离子和锌离子等的干扰。

2. 操作过程中，样品与试剂等避免与铁器接触，以防污染。

3. 所测样本的值高于标准曲线的上限，应稀释样品后重新测定。

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作，检测试剂有腐蚀性，请小心操

作，若不慎沾到皮肤上请马上用清水冲洗干净。

5. 该试剂盒仅供科学研究使用。