:铁是人体必需元素,对人体新陈代谢和身体健康具有重要作用,血液中铁含量不足,就会造成缺铁性贫血。铁存在于人体所有细胞内,各组织、器官包括各内分泌 腺都含有铁。肝脏、脾脏和肺组织内含量较为丰富。成人体内含铁 3~5 克,大部分都以蛋 白质复合物形式存在,少部分以离子形态存在。
并与亚铁嗪生成紫红色化合物,在 540-580nm 处可比色测定。
操作步骤:
1. 样品准备(以 24 孔板为例):
将含铁元素 DMEM 培养过细胞用冷 PBS 2ml 洗两遍,将 PBS 吸弃(若不马上检测可将 其冻存于-20℃)。200ul/孔裂解液裂解细胞,置于摇床裂解 2h。
2. 标准品稀释:用试剂盒提供稀释用液将 3mM 标准品母液稀释为:300 uM、150uM、
75uM、37.5uM、18.75uM、9.38uM、4.69uM。注意倍比稀释并设置 0 浓度对照反应管。
3. 将缓冲液与 4.5%高锰酸钾溶液按 1:1 混匀,称为混液 A。
4. 参考下表使用 1.5ml 离心管,设置空白对照管、标准品管和样品管。如果样品中铁元
素含量过高,用裂解液适当稀释后再进行测定。
5. 混匀,60℃ 孵育 1h。
6. 冷却至室温,将管盖与管壁上液滴离心入管底。
7. 加入 30ul 铁离子检测剂,混匀,室温孵育,30min。
8. 取 200ul 于 96 孔板,在 550nm 测定吸光度。如果不能测定 550nm,也可以在 540nm~580nm 范围内检测。
9. 绘制标准曲线并计算铁离子浓度。