植物体内的碳素营养状况以及农产品的品质形状,常以糖含量作为重要指标。单糖和某些寡糖(如麦芽糖)含有游离的醛基或酮基,具有还原性,属于还原糖;多糖和蔗糖等属于非还原糖。可以利用多糖能被酸水解为单糖的特性通过测定水解后的单糖含量对总糖进行测定。
检测原理是还原糖在碱性条件下被氧化成糖酸,3,5-二硝基水杨酸被还原为棕红色的氨基化合物。在一定范围内,还原糖的量与棕红色产物的颜色深浅程度呈一定比例关系。在540nm处测定棕红色物质的吸光度,该吸光度值与还原糖含量呈线性关系。
用途:轻工业部标准法DNS试剂。又称3,5-二硝基水杨酸法或简称DNS法,DNS试剂是植物总糖和还原糖检测(硝基水杨酸法)的成分,定量检测植物组织样品中的总糖和还原糖的含量。
试剂 1. 3,5-二硝基水杨酸试剂(DNS试剂)
1.甲液-溶解6.9克结晶酚(苯酚)于15.2毫升10%氢氧化钠中,并稀释至69毫升,再此溶液中加入6.9克亚硫酸氢钠。
2.乙液-称取255克酒石酸甲钠,加到300毫升10%氢氧化钠中,再加入880毫升1%3,5-二硝基水杨酸溶液。
3.将甲液和乙液相混合即得黄色试剂,保存于棕色试剂瓶中,在室温下放置7-10天后使用。 4.0.1%葡萄糖标准液 准确称取100毫克分析纯的葡萄糖(预先在105℃干燥至恒重),用少量蒸馏水溶解后定容至100毫升,保存于冰箱备用。