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食品中亚硝酸盐含量测定试剂盒说明书

点击次数:595 发布时间:2021/6/2 15:35:46
提 供 商: 南京亿迅生物科技有限公司 资料大小: 0
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详细介绍:

 

食品中亚硝酸盐含量测定试剂盒说明书
微量法 100T/96S
注意:正式测定之选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
在食品中,亚硝酸盐可与肉品中的肌红素结合而更安定,在食品加工业中作为保色剂,以维
持肉制品的良好外观,并防止肉毒梭状芽孢杆菌的产生,提高食用肉制品的安全,但是人体
长期摄入亚硝酸盐过量的食品,可诱发消化系统癌变。
测定原理:
在酸性条件下,亚硝酸盐与对氨基苯磺酸反应生成重氮化合物,再与 N-1-萘基乙二胺形成
紫红色偶氮化合物,在 540nm 处有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器
天平、研钵或匀浆器、水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液一:液体 50 mL×1 瓶,室温保存。
提取液二:液体 50 mL×1 瓶,室温保存。
提取液三:液体 50 mL×1 瓶,室温保存。
粉剂四:粉剂 100 mg ×1 支,室温保存。
试剂一:液体 10mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂二:液体 10mL×1 瓶,4℃避光保存。
样品处理:
称取样品约 0.2g 鲜重或 0.05g 干重,破碎,加入 0.5 mL 提取液一,沸水浴 15min,冷却至
室温,加入 0.5 mL 提取液二,震荡摇匀,加 0.5 mL 提取液三,用镊子加少量粉剂四(约 1
mg),静置 30min25℃,8000g 离心 15 min,取上清液待测。
测定步骤和操作表:
1、 分光光度计/酶标仪预热 30min,调节波长至 540nm,蒸馏水调零。
2、 操作表
                  测定管         空白管
蒸馏水(µL)                      70
样品(µL)          70          
试剂一(µL)        65                      65
试剂二(µL)        65                      65
混匀,25℃静置 15min,于微量石英比色皿/96 孔板中检测 540nm 处吸光值 AA=A 测定 - A 空白
注意:空白管只需测定一次。
亚硝酸盐含量计算:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线回归方程为:y=0.234x + 0.0002R2= 0. 999 x 为标准品亚硝酸钠浓度(μg/mly
为吸光值 A
NO2-(μg/g=(△A-0.0002÷0.234×V ÷V ÷V 样总×W×0.6668
=A – 0.086÷0.234×1.5×0.6668÷W
=4.27×(△A-0.0002÷W
V 样总:加入提取液体积,1.5 mLV 样:反应中样品体积,0.07mLW:样品质量,g
b.96 孔板测定的计算公式如下标准曲线回归方程为:y=0.141x +0.095R2= 0. 9991 x 为标准品亚硝酸钠浓度(μg/mly
为吸光值 A
NO2-(μg/g =(△A-0.0002÷0.141×V ÷V ÷V 样总×W×0.6668
=(△A-0.0002÷0.141×1.5×0.6668÷W
=7.09×(△A-0.0002÷W
V 样总:加入提取液体积,1.5 mLV 样:反应中样品体积,0.07mLW:样品质量,
g
注意事项:
1.试剂盒 2-8℃保存。
2.试剂对人体有一定的危害,请穿实验服,戴手套操作。
3.若检测出得 OD 值在标准曲线范围外,请将样品进行适当的浓缩或稀释(A540 <0.09
缩,A540 > 1.5 适当稀释)。
4.低检出限为 0.5μg/g

 
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