明胶酶谱试剂盒操作注意事项! 1.制备聚丙烯酰胺时应注意排除气泡。
2.明胶酶谱的活性受钙离子,锌离子,和PH值等因素的影响,因此缓冲液配制应严格准确,尽量用超纯水,孵育温度也掌握好。 3.用大梳子 4.孵育液的PHzui好在7.5-7.6,复性的TRITON时间长了会有絮状物,所以实验时尽量使用新鲜配置的。 5.孵育的37度不要在CO2培养箱中,因为会改变孵育液的PH值,在普通孵箱即可。 6.细胞样本用PBS 5倍体积震荡裂解,估算细胞的体积,然后加入5倍体积的PBS,涡旋振荡15-30s,而后静置或低速离心.或者手动震荡。 7.组织或者细胞的话可以用PBS,也可以用低渗溶液如三分或者四分的生理盐水按照5倍体积加入后震荡裂解细胞,离心即可,步骤和提蛋白很相似即可,其实重点的步骤主要是采用低渗裂解液进行裂解,组织的话可以匀浆20-30次,然后10000转左右离心,5分钟取上清即可。 |