羟脯氨酸检测试剂盒（分光光度法）说明书
规格: 50T/48S
产品简介：
HYP 是机体胶原蛋白主要成分，胶原蛋白大多分布于皮肤、腱、软骨和血管等，因此HYP 含量是反映 胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标。 样品经水解产生游离的HYP，进一补被氯胺T 氧化，氧化产物与对二甲氨基苯甲醛反应，产生红色化合物， 在560nm 处有特征吸收峰。通过测定样品水解液560nm 吸光值，可计算HYP 含量。
产品内容：
组织提取液：6mol/L 盐酸，自备。浓盐酸：H2O（V/V）= 1:1，室温保存； 细胞提取液：液体100mL×1 瓶，4 ℃保存； 试剂一：液体10mL×1 瓶，4 ℃避光保存； 试剂二：液体10mL×1 瓶，4 ℃避光保存。
操作步骤：
一、羟脯氨酸提取：
1. 组织：取约0.5g 样品于玻璃管，加入5mL 的组提取液，置于110℃烘箱，水解6 至12 小时，16000rpm，25℃， 离心20min，用提取液定容至5mL，取上清待测。 2. 细胞：取约500 万个细胞，加入2mL 的细胞提取液，于高压消毒器中15 磅保持30min，自然降压后待测。
二、测定操作：
对照管测定管 样本（mL） 0.2 试剂一（mL） 0.2 0.2 混匀，室温静置20min 试剂二（mL） 0.2 0.2 H2O（mL） 0.6 0.4 混匀，60℃，20min，取出后室温静置15 min，测定A560。(A560=A 测定-A 对照)
羟脯氨酸含量计算：
标准曲线：y=64.875x+ 0.0251，R2=0.9991 （1）按组织计算 HYP 含量（mg/g） =（A560-0.0251）÷64.875×V 反总÷(V 样÷V 样总×W) =0.385×（A560-0.0251）÷W （3）按细胞计算： HYP 含量（mg/104cell)= （A560-0.0251）÷64.875×V 反总÷V 样×V 样总÷细胞数量（万个） =0.154×（A560-0.0251）÷细胞数量（万个） V 反总：反应体系总体积，1mL； V 样：反应中样本体积，0.2mL；V 样总：加入提取液体积，mL； W： 样本质量，g。
注意事项：
1、OD 值大于0.8，样品适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。 2、试剂有一定的毒性，请操作时做好防护措施，防止吸入或与皮肤接触。 |
总访问量：3556565 管理登陆 版权所有:南京亿迅生物科技有限公司
