异柠檬酸裂解酶试剂盒说明书
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定 规格:50 管/48 样
产品内容 :
提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存; 试剂一:液体 15mL×1 瓶,4℃保存; 试剂二:液体 15mL×1 瓶,4℃保存; 试剂三:粉剂×3 瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入 5mL 蒸馏水,充分混匀待用;用不完的试剂仍-20℃保存; 试剂四:粉剂×3 瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入 5mL 蒸馏水,充分混匀待用;现配现用; 试剂五:液体×2 支,4℃保存;临用前每支加入 560μL 蒸馏水,充分混匀待用;用不完的试剂仍 4℃保存; 试剂六:粉剂×3 瓶,4℃保存;临用前每瓶加入 5mL 蒸馏水,充分混匀待用。用不完的试剂-20℃保存; 产品说明:
ICL(EC4.1.3.1)主要存在于植物和微生物中,油料作物种子在萌发过程中,通过乙醛酸循环及其他过程将脂肪转变成碳水化合物。ICL 是乙醛酸循环的关键酶。ICL 催化异柠檬酸降解为乙醛酸和琥珀酸,乙醛酸和 NADH 在 LDH 的作用下生成乙醇和 NAD,NADH 在 340nm 下有特征吸收峰,监测 340nm 吸光度的减小速率可间接反应 ICL 活性。 紫外分光光度计、台式 离心机、水浴锅、移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水 操作步骤:
一、样本的前处理:
1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);15000g 4℃离心10mi n,取上清,置冰上待测。 2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL提取液),进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。注意:若一次性测定样本较多,可将试剂一、二、三、四、五和样本按比例配成混合液,在 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴 5min 以上,测定时加入 1220µL 混合液和 300µL 试剂六测定。
异柠檬酸裂解酶试剂盒说明书
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