双链DNA中和缓冲液：DNA 中和缓冲液Ⅱ用于将DNA 碱性转移至尼龙膜上,由0.5M Tris-HCl (pH7.2)、氯化钠等组成,不含蔗糖,可用于核酸杂交,尤其适用于Southern blot 将DNA 转移至尼龙膜实验。本试剂仅用于科研域,不宜用于临床诊断或其他用途。
操作步骤(仅供参考):
1、 按实验具体要求操作。
2、或按如下步骤将凝胶置于变性溶液(碱性)中进行DNA 变性:
①转移到不带电荷膜上:a 、将凝胶置于10倍凝胶体积双链DNA 变性缓冲液中,室温放置45min ,并不断轻轻振荡。b 、用去离子水短暂浸泡凝胶,然后将凝胶浸没于10倍凝胶体积DNA 中和缓冲液Ⅰ中,室温放置30min ,并轻轻振荡;更换一次DNA 中和缓冲液Ⅰ继续浸泡15min 。
②转移到带电荷尼龙膜上:a 、将凝胶置于5-10倍凝胶体积DNA 中和缓冲液Ⅱ中,室温放置15min ,并不断轻轻振荡。b 、更换一次DNA 中和缓冲液Ⅱ继续浸泡20min ,并不断轻轻振荡。
缓冲溶液作用原理和pH值
当往某些溶液中加入一定量酸和碱时，有阻碍溶液pH变化作用，称为缓冲作用，这样溶液叫做缓冲溶液。弱酸及其盐混合溶液（如HAc与NaAc），弱碱及其盐混合溶液（如NH3•H2O与NH4Cl）等都是缓冲溶液。
由弱酸HA及其盐NaA所组成缓冲溶液对酸缓冲作用，是由于溶液中存在足够量碱A-缘故。当向这种溶液中加入一定量强酸时，H+离子基本上被A-离子消耗：
所以溶液pH值几乎不变；当加入一定量强碱时，溶液中存在弱酸HA消耗OH-离子而阻碍pH变化。
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