产品简介:本试剂盒采用碱裂解法裂解细菌,再通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA。离心吸附柱中采用的材料为本公司特有新型材料,拥有良好的流速、超强的DNA结合能力和优秀的洗脱效率。以下操作步骤适用于提取1-5 ml过夜培养的大肠杆菌,可以得到高纯度质粒DNA (OD260/OD280 = 1.8~2.0),制备过程无需苯酚抽提等步骤。
高效:可提取菌体85%以上质粒DNA。
常见问题解答
1. 未提出质粒或质粒得率较低
A. 大肠杆菌老化。请涂布平板培养后,重新挑选单菌落进行液体培养。
B. 质粒拷贝数低。可使用更多的菌量,同时相应增加溶液使用量。
C. 碱裂解不充分。使用菌体过多,导致裂解不充分,可减少菌体用量或增加Buffer I,II和III的用
量。
D. 溶液失效。Buffer II长期暴露在空气中易失效,请每次使用完后,立即盖紧瓶塞。
E. 质粒洗脱不完全。质粒洗脱时,可适当加温(37-70℃)或延长溶解时间,对大质粒效果更为明
显。
F. 乙醇残留。漂洗液洗涤后应离心尽量去除残留液体,再加入洗脱缓冲液。
G. 洗脱液加入位置不正确。洗脱液应加在硅胶膜中心部位以确保洗脱液会完全覆盖硅胶膜的表面,
达到大洗脱效率。
H. 洗脱液不合适。洗脱效率与洗脱液的pH值有关,请确保洗脱液pH>7.0。
I. 洗脱时间过短。洗脱时放置1分钟以上可达到较好的效果。如果是低拷贝质粒或质粒大于8 kb
时,可以分两次洗脱,对于大的质粒延长放置时间,让DNA完全溶解后再洗脱,可提高洗脱效
率
储存条件:
本试剂盒在室温(15-25℃)干燥条件下,可保存12个月;更长时间的保存可置于2-8℃。若溶液产生沉淀,应在使用置于37℃下溶解沉淀。单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月。加入RNase A后的溶液Buffer I应置于2–8℃保存,可稳定保存6个月。
主要应用:用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、序列分析、连接、转化、文库筛选、体外翻译、转染一些常规的传代细胞等。