6.标准品:5 mg ATP。临用加入 0.826 mL 蒸馏水配成 10 μmol/mL 的 ATP 标准溶液,用不完的试剂-20℃分装保存 4 周,避免反复冻融;
7.工作液的配制:临用请按试剂二(mL):试剂三(mL):试剂四(mL):试剂五(mL):试剂六(mL)=1:1:0.1:0.4:0.1 的比例配制(2.6mL,约 10T 的量),现配现用。
样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、 血清(浆)中 ATP 的提取:按照血清(浆)体积(mL):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议取约 0.1mL
血清(浆),加入 1mL 提取液),充分震荡,10000g,4℃离心 10min;取上清液至另一 EP 管中,加入 500μL
的氯仿充分震荡混匀,10000g 4℃离心 3min,取上清,置冰上待测(不可用于蛋白质含量测定)。
2、 组织中 ATP 的提取:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加
入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆,8000g 4℃离心 10min,取上清至另一 EP 管中,加入 500μL 的氯仿充分震
荡混匀,10000g 4℃离心 3min,取上清,置冰上待测(不可用于蛋白质含量测定)。
3、 细胞或细菌中 ATP 的提取:先收集细胞或细菌到离心管内,弃上清,按照细菌或细胞数量(104 个):提取
液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎(冰浴,功
率 20%或 200W,超声 2s,停 1s,总时间 1min),10000g 4 ℃离心 10min;取上清液至另一 EP 管中,加入 500μL
的氯仿充分震荡混匀,10000g 4℃离心 3min,取上清,置冰上待测(不可用于蛋白质含量测定)。
注:以上提取过程严格控制在冰浴条件下进行