BCA蛋白定量试剂盒实验流程BCA法是理想的蛋白质定量方法，在碱性环境下蛋白质分子中肽键结构与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu1+。BCA特异地与Cu1+结合形成稳定的紫蓝色复合物，在562nm处有大的光吸收值并与蛋白质浓度成正比，颜色的深浅与蛋白质的含量成正比，可以根据吸收值测定蛋白质浓度。该测定方法灵敏度高，操作简单，试剂及其形成的颜色复合物稳定性俱佳，并且受干扰物质去垢剂等影响小。
实验流程
1、 BSA标准品的稀释
1）取10µL 5mg/mL BSA标准品稀释至100µL，使其终浓度为0.5mg/mL。通常情况下，为了方便，可用蒸馏水稀释。
2）在96孔板中分别加入0,1,2,4,8,16,20µL稀释后的标准品（0.5mg/mL BSA），加蒸馏水将溶液补至20µL。建议每种浓度做2~3个复孔。
2、 BCA 工作液的准备
1） 按下列公式计算所需要的BCA工作液体积；
（标准曲线+未知样品个数）×(重复次数)×(每个样品所需的BCA工作液体积)=所需要BCA工作液的总体积
例如：需要测定标准曲线和3个样品的蛋白浓度，每个实验重复2次，每次实验需要200μL工作液：(5个标准曲线点+ 3个样品) × (2次重复) × (0.2mL) = 3.2mL工作液
2） 将50份A液与1份B液混合后得到工作液。
注意：当B液加入A液时，可看见浊度，轻轻晃动后消失，工作液为绿色。
3 、样品检测
在96孔板中加入适当体积的样品，用蒸馏水将样品体积补至20µL。
孵育30min；
注：也可在室温下放置2h，或60度孵育30min。BCA法测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深，并且显色反应会因温度升高而加快。
5 、在562nm处测其吸光度值，绘制标准曲线。
6 、根据标准曲线计算蛋白浓度。
产品特点
1.准确灵敏，线性范围广，BCA试剂的蛋白质测定范围是20~2000µg/mL；
2.快速：45min内完成测定，比经典的Lowry法快4倍而且更加方便；
3.不受样品中离子型和非离子型去污剂影响；
4.检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马氏亮蓝，可以酶标板法或分光光度计法测定蛋白质浓度。
总访问量：3560427 管理登陆 版权所有:南京亿迅生物科技有限公司
