碘化丙啶是一种溴化乙啶（EB）的类似物，可以嵌入DNA碱基，发出红色荧光，这种结合作用几乎没有序列倾向性，大约4-5个碱基可以结合1个染料分子。PI也可结合RNA，因此需使用核酸酶处理以区分DNA和RNA染色。PI一旦与核酸结合，其荧光信号可增强20-30倍，大激发波长向红色波段迁移~30-40nm，大发射波长向蓝色波段迁移~15nm，从而使其大激发/发射波长变为535/617nm（水溶液中PI的大激发/发射波长是493/636nm）。

 

PI不能通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色，常被用来与Calcein-AM，Hoechst 33258/33342或FDA等荧光化合物一起使用，同时对活细胞和死细胞进行染色和鉴定，用于细胞凋亡相关研究。PI的单独染色可以进行细胞周期的检测。PI适用于荧光显微镜，激光共聚焦显微镜，流式细胞仪及荧光分析仪。

 

使用方法：

 

1.   储备液配制：将碘化丙啶粉末充分溶解于去离子水中配制成1mg/ml（1.5mM）溶液，于+4℃避光保存，可稳定保存6个月以上。

 

2.   使用方法：

 

2.1贴壁细胞复染步骤（荧光显微镜检测）

 

1）样本准备：根据自身样本选择合适的步骤固定细胞。PI染色一般在其它染色完成后再进行。PI复染要求细胞经透化处理。

 

2）RNase酶处理：若样本使用多聚甲醛，甲醛或者戊二醛固定，则需要进行RNase处理。若样本用甲醇/醋酸或者丙酮固定，通常不需要此步操作。

 

a， 于2×SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡样本；

 

b， 将本品置于含有100 µg/mL DNase-free RNase的2×SSC溶液中37°C孵育20min；

 

c， 用2×SSC溶液清洗样本3次，每次1min。

 

3）复染：

 

a，于2×SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡样本；

 

b，直接用2X SSC稀释1mg/ml（1.5 mM）PI储存液 1:3000，得到500 nM的PI工作液。通常添加300µL染液足够用于一个盖玻片细胞制片。染色1-5min。

 

c，2×SSC清洗几次，流尽多余的缓冲液后，加入抗淬灭剂封片。

 

d，选择荧光显微镜的合适滤片进行观察。