检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶标仪在490nm波长处测定其光吸收值,在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值(OD值),来判断活细胞数量,OD值越大,细胞活性越强(如果是测药物毒性,则表示药物毒性越小)。
其它名称:噻唑兰;噻唑蓝溴化四唑;Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide;3-(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide
MTT配制方法
通常MTT配成的终浓度为5mg/ml,须用PBS(磷酸缓冲液)或生理盐水做溶剂。(市面上一般MTT的包装为100mg,250mg或1g)
1.对于100mg这样的小包装,厂家都是将MTT放入小管中的,建议不要再用天平称量分装,而应该一次性将其全配制成溶液,如100mg用20mlPBS来溶解。
具体做法:
预先在50ml离心管(没有的话,可用培养瓶替代)加入20ml的PBS,从中先吸取500-1000ul的PBS
装入含MTT的小管中,吹打若十次后将其移入50ml离心管,然后再混匀。可以重复几次以使小管中的MTT不残留于管内。将MTT完全混匀后,用0.22um滤膜过滤以除去溶液里的细菌,分装避光(避光袋或是黑纸、锡箔纸包住)可长期保存于-20度。按细胞培养板每孔需加10ul计算,一般每96孔板约需1ml,所以分装时可考虑每管分装1ml。
2.对于大包装,可按上述方法称取一部分溶解,也有人将粉剂分装在EP管里,用的时候现配,直接往培养板中加。
3.配制MTT时用PBS溶解,也有人用生理盐水配,60度水浴助溶。
【注意】
1、在配制和保存的过程中,容器好用铝箔纸包住。
2、配成的MTT需要无菌,MTT对菌很敏感。
3、MTT一般好现用现配,过滤后4度避光保存两周内有效,或配制成5mg/ml保存在-20℃。
度长期保存,避免反复冻融,好小剂量分装,用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用。
4、MTT有致癌性,用的时候小心,一定要带手套。有条件可以采用我司推荐的MTT试剂盒,价格合算后已经相当亲民。
5 、我司产品为非无菌包装,若用于细胞培养,请提做预处理,除去热原细菌,否则会导致染菌。
6、部分产品我司仅能提供部分信息,我司不保证所提供信息的权威性,以上数据仅供参考交流研究之用。