为了防止微生物污染,可将叠氮化钠作为抗菌剂加入抗体工作液中,保持终浓度为 0.02% (w/v)。抗体中都添加叠氮化钠,浓度范围为 0.02%-0.05%。抗体数据表的保存缓冲液部分对此有说明。
此外,如果要对活细胞进行染色或处理,或进行体内研究时,请务必使用不含叠氮化钠的试剂。抗菌剂会阻断细胞色素电子传递系统,对大部分生物体都有毒害作用。
高浓度的叠氮化钠会干扰涉及胺基的所有偶联反应,因此必须在进行偶联反应之将其去除。或可选用0.01%硫柳汞钠(硫柳汞),这种抗菌剂不含伯胺。
抗体溶液中的叠氮化钠可通过透析或凝胶过滤去除。IgG 的分子量为 150,000 Da(IgM 约为 600,000 Da),叠氮化钠的分子量为 65 Da。截留分子量为 14,000 Da 的微透析装置可去除叠氮化钠。
透析过程在烧杯中(置于磁力搅拌器上,温度保持 4 ℃)进行,每毫升抗体使用至少 1 升预冷的 PBS,搅拌透析装置 6 小时。更换 PBS 两次,每次更换后均搅拌至少 6 小时。如有可能,所有材料都应灭菌,并且应在无菌条件下处理所得制备物。