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  技术文章  
 

熟记抗体保存三大知识点,再也不怕抗体失效!


发布日期:[2024/7/9 17:26:20] 共阅[10]次

一、保存温度   

对于我们的大部分抗体而言,分装为小等份在 -20 ℃ 或 -80 ℃ 下冻存是很好保存条件。此外,在收到抗体后,也可暂时保存至4℃冰箱中,短期保存时间为1-2周。也有一小部分抗体适合保存于4℃冰箱。

分装应先离心沉降挂在管壁和管盖上的抗体,分装量取决于您的实验常用量,但建议不能少于10μl,以避免蒸发等造成抗体损失。分装后的抗体试剂应尽量避免反复冻融,可短时间(1-2周)保存于4℃冰箱中。

反复冻融可能使抗体变性,导致抗体形成聚集体,从而降低其结合能力。对大部分抗体而言,在-20 ℃下保存就已足够;在-80 ℃下保存并无明显优势。保存抗体要避免使用无霜冰箱,因为冻融循环(用于减少霜的形成)会造成抗体反复冻融而失活。

部分抗体试剂中会加入终浓度40%-50%的甘油使其在-20℃下保持溶液状态,从而降低冻融损伤。此类抗体产品请勿储存于-80℃冰箱中,否则仍会凝固。值得注意的是,抗体在加入甘油后容易被细菌污染,操作时应小心,确保无菌。

 

二、防止降解   

 

抗体试剂稀释至工作浓度后,建议及时使用,不建议对稀释后的抗体进行长时间保存。如果必须保存,建议保存于4℃并于一周以内使用。一般而言,蛋白质浓度高于1mg/ml时更不容易降解,因此部分抗体试剂中加入了牛血清白蛋白(BSA)作为蛋白质稳定剂来防止降解。加入的蛋白质还能尽可能减少抗体结合到容器壁上造成的损失。

需要注意的是,请勿向将要进行偶联的抗体中加入蛋白质稳定剂,因为蛋白质稳定剂会与抗体竞争,降低偶联效率。

 

三、防止污染
 
  

为了防止微生物污染,可将叠氮化钠作为抗菌剂加入抗体工作液中,保持终浓度为 0.02% (w/v)。抗体中都添加叠氮化钠,浓度范围为 0.02%-0.05%。抗体数据表的保存缓冲液部分对此有说明。

此外,如果要对活细胞进行染色或处理,或进行体内研究时,请务必使用不含叠氮化钠的试剂。抗菌剂会阻断细胞色素电子传递系统,对大部分生物体都有毒害作用。

高浓度的叠氮化钠会干扰涉及胺基的所有偶联反应,因此必须在进行偶联反应之将其去除。或可选用0.01%硫柳汞钠(硫柳汞),这种抗菌剂不含伯胺。

抗体溶液中的叠氮化钠可通过透析或凝胶过滤去除。IgG 的分子量为 150,000 Da(IgM 约为 600,000 Da),叠氮化钠的分子量为 65 Da。截留分子量为 14,000 Da 的微透析装置可去除叠氮化钠。

透析过程在烧杯中(置于磁力搅拌器上,温度保持 4 ℃)进行,每毫升抗体使用至少 1 升预冷的 PBS,搅拌透析装置 6 小时。更换 PBS 两次,每次更换后均搅拌至少 6 小时。如有可能,所有材料都应灭菌,并且应在无菌条件下处理所得制备物。

原创作者:南京亿迅生物科技有限公司

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