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免疫组化结果阴性的原因分析(仅供参考)


发布日期:[2024/7/4 17:15:33] 共阅[10]次

免疫组化结果阴性的原因分析

1. 抗体浓度和质量问题以及抗体来源选择错误;

2. 抗原修复不全,换修复液或加强修复;

3. 组织切片本身这种抗原含量低,设阳性对照片;

4. 血清封闭时间过长;DAB 孵育时间过短;

6. 细胞通透不全,抗体未能充分进入胞内参与反应。

 

非特异性染色的原因(着色一片黄/背景深)

1. 抗体孵育时间过长,抗体浓度;

2. 多抗易出现非特异性,可选择单抗;

3. 内源性过氧化物酶和生物素灭活不够;

4. 非特异性组分与抗体结合,延长血清封闭时间;

5. DAB 孵育时间过长或浓度过高;

6. PBS 冲洗不充分,残留抗体结果增强着色;

7. 标本染色过程中经常出现干片;

8. 脱蜡不充分;

9. 二抗与标本的内源性组织蛋白有交叉反应。

 

染色弱阳性

1. 固定方式不当或固定时温度过高,影响到抗原的数量和质量;

2. 不适当的抗原修复方式,抗原决定簇暴露不足;

3. 抗体的稀释度是否过高或者孵育的温度/时间不足;

4. 孵育抗体切片上遗留了过多的冲洗液;

5. 孵育时切片未放置水平,导致抗体孵育不均匀。

 

信号定位与预测不符的原因

1. 组织固定不及时,抗原扩散移位;

2. 抗体选择错误;

3. 膜蛋白核质染色:抗原修复过长,导致细胞膜破坏,膜蛋白转移。

原创作者:南京亿迅生物科技有限公司

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