间接法

間接法常用於檢測抗體，一般之操作步驟為：间接法常用于检测抗体，一般之操作步骤为：

1. 將已知之抗原固著於塑膠孔盤上，完成後洗去多餘之抗原将已知之抗原固着于塑胶孔盘上，完成后洗去多余之抗原
2. 加入待測檢體，檢體中若含有待測次抗體，則其會與塑膠孔盤上的抗原進行專一性鍵結加入待测检体，检体中若含有待测次抗体，则其会与塑胶孔盘上的抗原进行一性键结
3. 洗去多餘待測檢體，加入帶有酵素之二次抗體，與待測次抗體鍵結洗去多余待测检体，加入带有酵素之二次抗体，与待测次抗体键结
4. 洗去多餘未鍵結二次抗體，加入酵素受質使酵素呈色，藉儀器（ELISA reader）測定塑膠盤中的吸光值（OD值），以評估有色終產物的含量即可測量待測抗原的含量。洗去多余未键结二次抗体，加入酵素受质使酵素呈色，借仪器（ELISA reader）测定塑胶盘中的吸光值（OD值），以评估有色终产物的含量即可测量待测抗原的含量。

竞争法

競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機制，一般用於檢測小分子抗原，其操作步驟為：竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制，一般用于检测小分子抗原，其操作步骤为：

1. 將具有專一性之抗體固著於塑膠孔盤上，完成後洗去多餘抗體将具有一性之抗体固着于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体
2. 加入待測檢體，使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結加入待测检体，使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗体进行一性键结
3. 加入帶有酵素之抗原，此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結，由於塑膠孔盤上固著的抗體數量有限，因此當檢體中抗原的量越多，則帶有酵素之抗原可鍵結的固著抗體就越少，亦即，兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗體鍵結，即所謂競爭法之由來。加入带有酵素之抗原，此抗原也可与塑胶孔盘上的抗体进行一性键结，由于塑胶孔盘上固着的抗体数量有限，因此当检体中抗原的量越多，则带有酵素之抗原可键结的固着抗体就越少，亦即，两种抗原皆竞相与塑胶孔盘上抗体键结，即所谓竞争法之由来。
4. 洗去檢體與帶有酵素之抗原，加入酵素受質使酵素呈色，當檢體中抗原量越多，代表塑膠孔盤內留下之帶有酵素的抗原越少，顯色也就越淺。洗去检体与带有酵素之抗原，加入酵素受质使酵素呈色，当检体中抗原量越多，代表塑胶孔盘内留下之带有酵素的抗原越少，显色也就越浅。

當需要偵測無法獲得兩種以上單一性抗體的抗原，或是不易得到足夠的純化抗體以固著於孔盤上時，一般會考慮使用競爭法ELISA。当需要侦测无法获得两种以上单一性抗体的抗原，或是不易得到足够的纯化抗体以固着于孔盘上时，一般会考虑使用竞争法ELISA。