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  技术文章  
 

兔抗绵羊红细胞(溶血素)实验操作步骤说明


发布日期:[2023/11/1 14:21:37] 共阅[5001]次
 利用绵羊细胞与相应抗体(溶血素)结合成的复合物,可激活血清中的补体,导致红细胞溶解,当红细胞和溶血素量一定时,在规定反应的时间内,溶血程度与补体量及活性呈正相关。在接近50%溶血(CH50)时,二者之间近似直线关系,故以50%溶血作为敏感的判断终点。以引起50%溶血所需的小补体量为一个 CH50U,可计算出待测血清中总的补体溶血活性,以 CH50U /ml表示。

 

产品全称:冻干兔抗绵羊红细胞(冻干溶血素)

规格:0.5ml*10

效价:1:4000

批号:20230511

保存:-20℃,避光保存,避免反复冻融

有效期:12个月

使用方法:临用,每瓶加去离子水或者双蒸水0.5ml重建后立即使用(10小时内),不得反复使用。

相关实验测定步骤:(仅供参考)

 

本试验主要反映补体经典活化途径的溶血功能,其结果与补体C1~C9各组成分的量及活性均有关
1.试剂及配制
(1)缓冲生理盐水:
贮存液:
 Na2HPO4·12H2  2.85g

KH2PO4           0.27g (加蒸馏水至100毫升,4保存)
 NaCl             17.00g

应用液(缓冲液):5毫升贮存液加95毫升蒸馏水,再加10%硫酸镁0.1毫升。当日配制。12小时内使用。
(2)2%羊红细胞:无菌采取绵羊血液,于等量Alsever中可保存3周。用以缓冲液
3次,并配成2%细胞悬液。必要时可用吸光光度法或细胞计数法使悬液细胞浓度标准化。
(3)溶血素:将本品(效价1:4000),用缓冲液做1:2000倍稀释(即1ml溶血素加1999毫升缓冲液)。
(4)待测血清:新鲜血液室温放置30分钟,再4放置60分钟,使血块收缩。4离心
(3000r/min )10分钟,取上清,-20保存。
2.试管法操作步骤(改良 Mayer 法)
(1)致敏羊红细胞:2%绵羊红细胞加等量稀释后的溶血素(1:2000),混匀,置37水浴30分钟。

(2)稀释血清:待测血清0.2ml,加缓冲液3.8ml,稀释度为1:20
(3)配制溶血标准管:2%绵羊红细胞2ml8ml蒸馏水,混匀,即为全溶血管。取全溶血管液2ml加缓冲液2m1,即为50%溶血管。
(4)按表所示,依次加各成分于试管中,混匀,置37水浴30分钟。第10管为非溶血对照。


             补体 CH50 测定试管法

 

成分

试管号

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

1:20待测血清

0.10

0.15

0.20

0.25

0.30

0.35

0.40

0.45

0.50

-

缓冲液(ml

1.40

1.35

1.30

1.25

1.20

1.15

1.10

1.05

1.00

1.50

致敏红细胞(ml

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

 

(5)结果测定:取出试管,2000r/min 离心10分钟,对照管应不溶血。肉眼比色,选与
50%溶血标准管相近二管,再用分光光度计测(波长542nm0.5cm比色杯OD 值,确定与标准管接近者为终点管,然后按下公式计算CH50值:血清补体CH50 ( U /ml)=(1/血清用量)稀释度。
如第5管为终点管,测待测血清中 CH5066.7U/ml 。血清补体CH50正常值为50-100U/ ml 

 

原创作者:南京亿迅生物科技有限公司

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