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总抗氧化能力(DPPH法)测试盒样本如何正确处理


发布日期:[2020/6/18 17:21:21] 共阅[61]次
总抗氧化能力(DPPH法)测试盒样本如何正确处理


测定对象中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平。在生物学、医学和药学研究中 常常检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液,细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液 及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。


测定原理:
DPPH 为稳定的自由基 ,溶于甲醇、乙醇等极性溶剂中,在 515nm 处有*吸收。向 DPPH 溶液中加入抗氧化剂时,会发生脱色反应,因此可用吸光度的变化并以 Trolox 作为对照体 系量化抗氧化物质的抗氧化能力。 自备实验用品: 恒温水浴锅、低温离心机、分光光度计、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。


试剂组成和配制: 提取液:液体 60mL×1 瓶,使用前预冷。
试剂一:液体 60mL×1 瓶,避光保存。

样品的制备:

(1) 血清、血浆、唾液或尿液等液体样品 血浆(制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝,不宜使用 EDTA 抗凝)4℃,5000rpm 离心 10min,取上清待测。血清、唾液或尿液样品直接用于测定,也可以-80℃冻存(不宜超过 30 d)后再测定。

(2) 组织样品 按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液)进行冰浴匀浆,然后 10000g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

(3) 细胞样品 按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎(功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);10000g, 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。


注意事项:
1. 尽量避免使用在酸性条件下呈红色或接近红色的试剂,否则对本试剂盒的检测结果产生干扰。
2. 样品中不宜添加 Tween、Triton 和 NP-40 等去垢剂和 DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反应的还原剂。
3. 若液体样本为碱性,需要用提取液稀释至酸性后再检测。

总抗氧化能力(DPPH法)测试盒样本如何正确处理

原创作者:上海信帆生物科研所

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