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总抗氧化能力（DPPH法）测试盒样本如何正确处理
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发布日期：[2020/6/18 17:21:21] 共阅[2963]次 |
总抗氧化能力（DPPH法）测试盒样本如何正确处理
测定对象中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平。在生物学、医学和药学研究中 常常检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液 及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。
测定原理：
DPPH 为稳定的自由基 ，溶于甲醇、乙醇等极性溶剂中，在 515nm 处有吸收。向 DPPH 溶液中加入抗氧化剂时，会发生脱色反应，因此可用吸光度的变化并以 Trolox 作为对照体 系量化抗氧化物质的抗氧化能力。 自备实验用品： 恒温水浴锅、低温离心机、分光光度计、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制： 提取液：液体 60mL×1 瓶，使用前预冷。
试剂一：液体 60mL×1 瓶，避光保存。
样品的制备：
(1) 血清、血浆、唾液或尿液等液体样品 血浆（制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝，不宜使用 EDTA 抗凝）4℃，5000rpm 离心 10min，取上清待测。血清、唾液或尿液样品直接用于测定，也可以-80℃冻存（不宜超过 30 d）后再测定。
(2) 组织样品 按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
(3) 细胞样品 按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎（功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；10000g， 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
注意事项：
1. 尽量避免使用在酸性条件下呈红色或接近红色的试剂，否则对本试剂盒的检测结果产生干扰。 2. 样品中不宜添加 Tween、Triton 和 NP-40 等去垢剂和 DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反应的还原剂。 3. 若液体样本为碱性，需要用提取液稀释至酸性后再检测。
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