基因组 DNA 提取过程中注意事项

样品的预处理方式

植物材料：液氮研磨

动物材料：匀浆、液氮研磨

细菌：溶菌酶破壁

酵母：破壁酶，玻璃珠研磨

基因组提取常见问题

◆ 洗涤后硅胶膜上仍有杂质残留：

细胞裂解不充分, 裂解液和样品要快速充分混匀。

◆ 柱子堵塞：

1.裂解或匀浆处理不彻底。减少样品使用量，增加裂解液用量，增加匀浆和裂解时间。

2.处理样品太多。

◆ 洗脱产物 DNA 量很少或没有：

1.样品中细胞或病毒浓度低。

2.裂解液和样品混合不均匀造成的细胞裂解不充分。

3.蛋白酶 K 活性下降造成的细胞裂解不充分。

4.温浴时间不够造成的细胞裂解不充分或蛋白降解不完全，尽量把组织切成小块，延长温浴时间，使裂解物中没有颗粒状物质残留。

5.在上柱前，裂解物中没加乙醇，或用低浓度乙醇dai替无水乙醇。

6.DNA 没有有效洗脱。提高洗脱效率，可将离心吸附柱加入洗脱液后在室温静置至少 1 min，再离心。

7.洗脱液 pH 不合适，低 pH 值会减少 DNA 产率。确保洗脱液 pH 值在 7.0－8.5 之间。

8.洗脱体积太大，超过 200μl 洗脱体积所得的 DNA 浓度会降低，但 DNA 总量不会减少。

• A260/A280 比值较低：

用水作为洗脱液时，比值偏低。

• A260/A280 比值较高：

大量 RNA 残留，没有使用 RNase A，或 RNase A 活性下降。

• DNA 影响后续酶反应实验：

1.在洗脱液中有残留的漂洗液 W1，可通过再次离心去除硅胶膜上的 W1。

2.大量 RNA 残留。

◆ 缓冲液 A、B 中有白色沉淀：

白色沉淀可能由于低温或长时间放置产生，可在使用前在 56℃重新加热溶解。

◆ 操作中加入缓冲液 B 有白色沉淀：

缓冲液 B 加入后产生的白色沉淀在 70℃温浴时会消失，不会影响下游操作。


基因组 DNA 提取过程中注意事项