发布时间：2017/9/28 16:35:44 阅读人数：3022
一、试剂组成及配制(100 管/96 样)：
| 试剂组成 | 规格 | 组份 | 浓度 | 保存条件 |
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R1 |
75ml×1 瓶 | Good’s 缓冲液 | 50mmol/L |
2～8℃ 避光保存 |
| Toos | 1mmol/L | |||
| 氯化镁.6 合水 | 15mmol/L | |||
| 胆固醇氧化酶 | ≥3KU | |||
| 过氧化物酶 | ≥5KU | |||
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R2 |
25ml×1 瓶 | Good’s 缓冲液 | 50mmol/L | |
| 4-氨基安替比林 | 0.2mmol/L | |||
| 氯化镁.6 合水 | 15mmol/L | |||
| 胆固醇酯酶 | ≥3KU | |||
| 表面活性剂 | 0.1% | |||
| 校准品 | 0.1ml×1 支 | 胆固醇 | 1.8mmol/L |
二、操作过程:
1、样本处理:
①、血清(浆)：直接测定，如超过线性范围用生理盐水稀释后测定。
②、培养液样本：吸取培养液，1000 转/分，离心 10 分钟，取上清测定。
[注]：一般建议细胞密度在 100 万个/ml 以上。
③、组织样本：准确称取组织重量，按重量(g)：体积(ml)=1：9 的比例，加入 9 倍体积的匀浆 介质，冰水浴条件下机械匀浆，2500 转/分，离心 10 分钟，取上清液待测。
[注]:1、如组织样本为非高脂样本，匀浆介质统一用磷酸盐缓冲液(0.1mol/L pH 7.4)或生理盐水进行提取。 2、如组织样本为高脂样本或部分为高脂样本，匀浆介质可统一用无水乙醇进行提取。
④、细胞样本：
A、细胞收集:将制备好的细胞悬液取出，1000 转/分，离心 10 分钟，弃上清液，留细胞沉 淀；用等渗缓冲液（推荐 0.1mol/L 、pH7～7.4 磷酸盐缓冲液）清洗 1～2 次，同样 1000 转/分，离心 10 分钟，弃上清液，留细胞沉淀；
B、细胞破碎:加入 0.2～0.3ml 的匀浆介质（推荐 0.1mol/L、pH7～7.4 磷酸盐缓冲液或生理 盐水）进行匀浆，冰水浴条件下超声破碎(功率：300W,3～5 秒/次，间隔 30 秒，重复 3～ 5 次)或手动匀浆，制备好的匀浆液不离心待测。也可采用裂解液裂解(推荐 TritonX-100，
1～2%，裂解 30～40 分钟)，裂解好的液体不离心直接测定。
[注]：一般建议细胞密度在 100 万个/ml 以上。破碎好的液体可显微镜观察细胞是否破碎完全
2、操作表：
| 普通试管操作，分光光度计比色 | |||
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| 空白管 | 校准管 | 样本管 |
| 蒸馏水（μl） | 10 |
|
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| 1.8mmol/L 校准品（μl） |
| 10 |
|
| 样本（μl） |
|
| 10 |
| R1（μl） | 750 | 750 | 750 |
| 混匀，37℃孵育 5 分钟，波长 546nm，光径 0.5cm，蒸馏水调零，测定各管吸光度值 A1 | |||
| R2（μl） | 250 | 250 | 250 |
混匀，37℃孵育 5 分钟，波长 546nm，光径 0.5cm，蒸馏水调零，测定各管吸光度值 A2
三、计算公式及举例:
1、血清等液体样本计算公式:欢迎索要说明书
2、组织、细胞样本计算公式:欢迎索要说明书
四、测定原理：略
五、性能指标：
1、试剂空白管吸光度≤0.010（光径 0.5cm）。
2、线性范围：0.65～3.8mmol/L，r2＞0.995。
3、灵敏度：测试 1.3mmol/L 被测物时，吸光度值△A 在 0.087～0.153 之间。
4、准确度：相对偏差≤10%。
5、精密度：CV≤3%，批间相对极差≤5%。
6、稳定性：原包装试剂盒在 2℃～8℃避光保存，有效期为 12 个月。开启后 2℃～8℃避光保存， 可稳定一个月。
六、注意事项:
1、本产品仅用于科研，不得用于临床诊断，切勿服用。
2、样品含量如超出检测范围上限时，可用生理盐水稀释样本后进行测定，测定结果乘以稀释倍数。
3、试剂防止葡萄糖、胆固醇等试剂的污染。
4、试剂与样本量可按照比色杯体积，按比例增减。
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原创作者：南京亿迅生物科技有限公司
